探討磁性粒子於回收絲狀真菌的研究

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周情凱(Ching-kai Chou) 查詢紙本館藏

畢業系所

化學工程與材料工程學系

論文名稱

探討磁性粒子於回收絲狀真菌的研究
(Investigate the magnetic particles on the recovery of filamentous fungi research)

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摘要(中)

絲狀真菌是指真菌的一種型態，是以絲狀菌絲構成的。真菌對人類而言是一種相當重要的資源，它的衍生功能相當的多，像是生長過程中所產的代謝物，在我們的醫療、農業及工業等方面皆佔有很重要的地位。目前學術界對於真菌已有相當的研究，其中一種就是將真菌行固定化，而固定化菌體就是希望能達到回收再利用的目的。菌體經由固定化後可以節省菌體生長的時間並減少營養源的消耗，且可以重複利用菌體將所產生的代謝物產量給提高，但一般利用不織布或棉布的固定化方法會影響到菌體生長的情形，菌體的型態改變之後勢必會影響到菌體的代謝情況。
本研究以屬於絲狀真菌的裂褶菌(Schizophyllum commune)為研究的主軸，先利用氧化鐵磁性粒子(Fe3O4)來回收菌體，以達固定化的目地，並且利用Fed-batch 1次的方式來探討其對代謝物多醣產量的影響，並與一般的固定化方式(不織布)比較。
結果顯示，氧化鐵磁性粒子(Fe3O4)可以成功用於回收裂褶菌，並且實行1次Fed-batch實驗後，發現裂褶菌多醣產量較batch高2.4倍，產率也提升了3倍左右，而一般的固定化方法卻未能有效提高產物含量及產率。
另外在行Fed-batch時我們減少氮源的含量，發現多醣量可以較batch的多醣量高出約3倍，效果比未將氮源減少的2.4倍還好，單位菌體對產物的轉化率Yp/x也可提升1.7倍，而一般的固定化方法卻無此效果。
Fe3O4之所以能回收裂褶菌，是因為其會黏附在菌體的表面，本研究也簡單利用定性的方法來探討黏附的行為，並以其它絲狀真菌Aspergillus niger及Penicillim brevicompactum來驗證。
為了改善Fe3O4無法從菌體上脫落的缺點，本研究以溫度敏感性磁性粒子(PolyNIPAAm-Fe3O4)來進行裂褶菌的回收，此磁性粒子擁有LCST(Lower Critical Solution Temperature)的性質。結果發現在室溫25℃時PolyNIPAAm-Fe3O4並不會有吸附菌體的現象，而把環境溫度提升到50℃時才會有吸附的行為。

摘要(英)

Filamentous fungi refers to a type of fungus, is composed of filamentous hyphae. Fungi were very important resources in terms of human, and its considerable multi-functional derivatives, such as the growth process of the metabolites produced in our health care, agriculture and industries are a very important position. At present, the fungus has been considerable academic research, which is immobilizing fungi; immobilized cell is to achieve the purpose of recycling. Immobilized cell by cell growth can save time and reduce the consumption of nutrients, and can re-use will be produced by fungal metabolites to increase the yield, but generally the use of fixed method of non-woven or cotton cloth will affect the fungi Growth of the case, the morphology changed after the cell is bound to affect the metabolism of fungi.
In this study, belonging to the filamentous fungi Schizophyllum commune for the study of the spindle, the first use of magnetic particles (Fe3O4) to recover the cell to achieve the purposes immobilized, and the use of Fed-batch 1 time the way to explore its metabolites yield of polysaccharide and with the general approach of the fixed (non-woven) to compare.
The results showed that magnetic particles (Fe3O4) can be successfully used for recovery of Schizophyllum commune, and the implementation of 1 Fed-batch experiments, we found that production of Schizophyllum commune polysaccharide than 2.4 times the high batch production rate increased about 3 times , and immobilized in general are not effective methods to improve content and product yield.
In addition, among the Fed-batch, we reduce the nitrogen source, the amount of polysaccharide can be found in the polysaccharide than the batch volume about 3 times than not reduce the nitrogen 2.4 times better, the product of unit cell of the conversion rate of Yp / x can also be upgraded to 1.7 times, and general methods of no fixed effect.
Fe3O4 reason Schizophyllum commune recovery because of its will in the cell surface adhesion, the simple use of qualitative research methods to study the adhesion behavior, and other filamentous fungi Aspergillus niger and Penicillim brevicompactum to verify.
In order to improve on Fe3O4 fungal shedding from the shortcomings of this study, the temperature sensitivity of magnetic particles (PolyNIPAAm-Fe3O4) to carry out the recovery of Schizophyllum commune, the magnetic particles have a LCST (Lower Critical Solution Temperature) in nature. The results showed that at room temperature at 25 ℃ PolyNIPAAm-Fe3O4 does not have the phenomenon of bacterial adsorption, and the ambient temperature to 50 ℃ when the act will be adsorbed.

關鍵字(中)

★ 裂褶菌
★ 固定化
★ 磁性粒子

關鍵字(英)

★ magnetic particle
★ immobilization
★ recovery

論文目次

摘要 I
Abstract III
誌謝 V
目錄 VI
圖目錄 XI
表目錄 XV
第一章緒論 1
1-1研究動機 1
1-2 研究目的 2
第二章文獻回顧 3
2-1 真菌 3
2-1.1 真菌介紹 3
2-1.2 真菌應用 3
2-1.3 真菌的分類 4
2-1.4 真菌多醣體 5
2-1.5 β-D-葡聚糖 7
2-1.6 真菌多醣商業價值 8
2-2裂褶菌 (Schizophyllum commune) 9
2-2.1 簡介 9
2-2.2 裂褶菌多醣 10
2-2.3 裂褶菌多醣應用 13
2-3 微生物固定化 14
2-3.1 固定化發展 14
2-3.2 固定化方法 16
2-3.3 固定化微生物以提升產物產量 20
2-4 無機磁性粒子 25
2-4.1 無機磁性粒子特性 25
2-4.2 氧化鐵磁性奈米粒子的製備 26
2-4.3 Fe3O4磁性粒子於固定化應用 27
2-5 溫度敏感性磁性粒子 29
2-5.1 LCST的形成原因 29
2-5.2 溫度敏感性磁性粒子於固定化的應用 30
第三章實驗材料與方法 33
3-1 實驗規劃 33
3-2實驗材料與設備 34
3-2.1實驗藥品 34
3-2.2 實驗儀器與設備 35
3-2.3 實驗菌株： 37
3-2.4培養基組成 38
3-3 實驗方法 40
3-3.1 氧化鐵磁性粒子(Fe3O4)的製備 40
3-3.2 溫度敏感性磁性粒子(PolyNIPAAm-co-Fe3O4)的製備 41
3-3.3 尼龍不織布於固定化裂褶菌搖瓶實驗 44
3-3.4 尼龍不織布於固定化裂褶菌1次Fed-batch搖瓶實驗 44
3-3.5 添加氧化鐵磁性粒子(Fe3O4) 於裂褶菌搖瓶實驗 45
3-3.6 氧化鐵磁性粒子(Fe3O4) 後添加於裂褶菌及回收1次Fed-batch搖瓶實驗 46
3-3.7 Fe3O4 不同添加量於回收裂褶菌1次Fed-batch搖瓶實驗 46
3-3.8 溫度敏感性磁性粒子回收裂褶菌的研究 47
3-3.9 磁性粒子於不同外在環境下的磁力展現 48
3-4 實驗分析方法 49
3-4.1氧化鐵磁性粒子(Fe3O4)與溫度敏感性磁性粒子(PolyNIPAAm-co-Fe3O4)性質分析 49
3-4.2 發酵液處理流程 51
3-4.3 利用光學顯微鏡(OM)觀察磁性粒子黏附菌體現象 54
3-4.4 磁性粒子於不同外在環境下的磁力展現分析方法 54
第四章實驗結果與討論 55
4-1 氧化鐵磁性粒子(Fe3O4)製備 55
4-2 溫度敏感性磁性粒子(PolyNIPAAm-co-Fe3O4)的製備 57
4-2.1 製備穩定磁性流體 (PAA-co-Fe3O4) 57
4-2.2 穩定磁性流體與Styrene合成 (PS-co-Fe3O4) 63
4-2.3 溫度敏感性磁性粒子合成 (PolyNIPAAm-co-Fe3O4) 66
4-3尼龍不織布於固定化裂褶菌搖瓶實驗結果 73
4-4 尼龍不織布於固定化裂褶菌1次Fed-batch搖瓶實驗 75
4-5. 探討氧化鐵磁性粒子(Fe3O4) 於回收裂褶菌及Fed-batch搖瓶實驗 76
4-5.1 添加氧化鐵磁性粒子(Fe3O4) 於裂褶菌搖瓶實驗 77
4-5.2 氧化鐵磁性粒子(Fe3O4) 後添加於裂褶菌及回收1次Fed-batch搖瓶實驗 81
4-5.3 Fe3O4與尼龍不織布於裂褶菌1次Fed-batch比較 87
4-6 Fe3O4不同添加量於裂褶菌1次Fed-batch之搖瓶實驗 89
4-7 探討氧化鐵磁性粒子(Fe3O4)黏附於絲狀真菌上的因素 92
4-7.1 氧化鐵磁性粒子(Fe3O4)與菌體的表面特性 92
4-7.2 探討黏附因素 92
4-7.3 Fe3O4於Aspergillus niger及Penicillim brevicompactum的黏附 96
4-8 溫度敏感性磁性粒子回收裂褶菌的研究 99
4-9 磁性粒子於不同外在環境下的磁力展現 102
第五章結論與建議 109
5-1 結論 109
5-2 建議 111
第六章參考文獻 112

參考文獻

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指導教授

徐敬衡(Chin-Hang Shu)

審核日期

2009-7-22

推文