探討NaCl對於Streptomyces toxytrini發酵生產脂肪抑制劑Lipstatin的影響

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Title:	探討NaCl對於Streptomyces toxytrini發酵生產脂肪抑制劑Lipstatin的影響
Authors:	林蘭君;Lan-Chun Lin
Contributors:	化學工程與材料工程研究所
Keywords:	氯化鈉;羅氏纖;酵素動力學;分光光度計;脂肪抑制劑;放線菌;lipase inhibitor;NaCl;Streptomyces toxytricini;Orlistat;Lipstatin
Date:	2005-07-04
Issue Date:	2009-09-21 12:26:02 (UTC+8)
Publisher:	國立中央大學圖書館
Abstract:	近年來，肥胖已是大多數人所關心的話題，因為肥胖引起的併發症如心血管疾病、高血壓等都足以致死，從美國癌症預防第二期研究的數據分析，超過30萬名不吸煙且沒有心臟病史的成人，無論男女在14年間的心血管疾病死亡率隨BMI的增加而成長( BMI為體脂肪指數)，肥胖者死於心血管疾病的機率是最瘦的女性們的四倍，過量攝取食物中的脂肪是導致肥胖的主要原因，但多數肥胖者無法長期控制飲食及行為的方法成功減重，因此藥物的幫助就更顯重要。 Orlistat(羅氏纖)是1981年羅氏大藥廠 (Roche) 科學家從真菌及細菌中尋找可用於控制體重的藥物，發現一株名為Streptomyces toxytricini的放線菌發酵後的發酵液分離純化後的衍生物有著高度抑制腸胃道脂肪的成分，並且對於因肥胖所導致的心血管疾病有著相當的療效。產物Lipstatin是Orlistat氫化前的前趨物，由於活性較高，因此羅氏大藥廠選擇活性較低但穩定性較高的Orlistat在市場上銷售，而我們的實驗是針對未氫化前的lipstatin做研究。第一個實驗是定性分析，先將我們經由Streptomyces toxytricini發酵得到的發酵液分離纯化後得到產物Lipstatin，利用HPLC、LC/MS的鑑定，確認我們的生產過程是正確的，並可產出我們所要的產物。文獻指出，Lipstatin從發酵液纯化的過程必須經過分離、兩次矽膠管柱層析與一次C18的管柱層析才能完成，之後才能將純化過後的Lipstatin以HPLC定量，過程繁複且費時，因此我們利用Lipstatin抑制酵素的性質發展出酵素法，將定量的方法簡化。另外文獻指出生產1.77g的Lipstatin需要41kg的菌絲體來作純化，由此可知產量很低，因此提高產量也是實驗的重點，在實驗中發現菌種對於添加適當濃度的NaCl對於菌體與產物的產量皆有幫助，在添加5 g/l NaCl時，菌體轉化率有最大值Yx/s=0.298；而在產物方面，添加15 g/l 之NaCl為最佳，產物轉化率可達到Yp/s=12.343。
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