水稻mRNA Deadenylation 分子機制之研究(I);Mechanism of mRNA Deadenylation in Rice (I)

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题名:	水稻mRNA Deadenylation 分子機制之研究(I);Mechanism of mRNA Deadenylation in Rice (I)
作者:	陸重安
贡献者:	生命科學研究所
关键词:	農藝
日期:	2006-07-01
上传时间:	2010-12-06 16:14:32 (UTC+8)
出版者:	行政院國家科學委員會
摘要:	基因表現的調控機制，一般可以區分為轉錄階層(transcriptional level) 與後轉錄階層 (post-transcriptional)；長久以來人們對於基因表現在轉錄階層的調控機制瞭解較多，對後轉錄階層的調控機制則所知甚少。細胞中mRNA的half- life 的長短將影響到該基因的蛋白質轉譯。高等生物mRNA 降解的過程是poly A tail 首先被分解，接著進行 5』decapping，最後5』exonuclease 或3』exonuclease 進行5』到3』方向或3』到5』方向的RNA 分解。而poly A tail 的分解是大部份mRNA 降解的速度決定步驟。目前已經知道CAF1 與CCR4 這兩個蛋白質具deadenylase 的功能，所以一般相信它們直接參與mRNA degradation，然而我們並不瞭解CAF1 與CCR4 基因在植物系統中是否有相同的功能。先前我已經從玉米中分離出與酵母菌CAF1 類似的基因, ZmCAF1A, ZmCAF1B and ZmCAF1C。其中ZCAF1A 經過細胞體外的初步分析，我們瞭解它亦具有deadenylase 的功能，顯然植物的CAF1 極有可能亦參與了mRNA degradation。而從酵母菌的研究中得知CAF1 與CCR4 蛋白質會互相結合一起進行deadenylase 的功能。因此為了進一步了解CAF1 與CCR4 基因在植物體中的重要性與是否互相結合併參與mRNA deadenylation，我們期望以單子葉模式植物-水稻為基礎，分析CAF1 與CCR4 基因的功能與mRNA deadenylation 間的關係。為了研究水稻CAF1 與CCR4 基因的功能是否與 mRNA deadenylation 之分子機制間的關係，我們首先必須分離出水稻的CAF1 與CCR4 基因，然後分析基因的表現，用以釐清水稻CAF1 與CCR4 基因組中各別CAF1 與CCR4 基因在不同組織或器官中的表現模式。另外我們將在E.Coli 表現系統中大量的表達水稻 CAF1 與CCR4 的重組蛋白，進而分析CAF1 與CCR4 重組蛋白的生化活性。然後利用 yeast 與rice two-hybrid 來確認OsCAF1 與OsCCR4 之間的結合關係。最後我們將使用基因轉殖方法將OsCAF1 與OsCCR4 基因在水稻中大量表現，另一方面進行anti-sense 或RNAi抑制水稻內生OsCAF1 與OsCCR4 基因的表現，如此我們可以進一步瞭解CAF1 與OsCCR4 基因在水稻中的角色，然後進行OsCAF1 與OsCCR4 之下游基因的篩選。研究期間：9408 ~ 9507
關聯:	財團法人國家實驗研究院科技政策研究與資訊中心
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